Diciembre 2008

Hola Compañeros!

¡Feliz día de Acción de Gracias y Feliz Navidad! Hablemos de Ciencia…Este semestre ha sido uno de muchos contratiempos y obstáculos, pero de eso se trata esto. Luego de examinar mis resultados de mayo 2008 y proponer mis objetivos a principios de agosto pasado, he cumplido con algunos de esos objetivos, sin embargo no hemos avanzado mucho en el proyecto como tal. Bueno en el ultimo post que hice me quedé en que había transformado mis BL-21 cells electrocompetentes con pGEM (vector muy bueno para clonación). Recientemente volví a transformas las mismas bacterias con PGEM y las crecí en un plato con Agar, ampicilina mas IPTG y X-Gal. Esto me ayudo a ver el crecimiento y crecieron color azul, debido a la inducción del gen lacZ y la metabolización de X-Gal. Luego de ser positivo el crecimiento, se tomó una colonia azul y se inoculo en medio liquido LB + Amp y se incubo a 37°C. Luego se ser positivo el crecimiento se inocularon 2mL de ese cultivo en un Erlenmeyer con 50mL de LB + Amp y otros 2mL en otro Erlenmeyer con 50mL de LB + Amp. Se incubaron los frascos con agitación a 37°C hasta conseguir un OD ~ 0.6. Luego a uno de ellos se le añadió 2mL de IPTG y al otro 2mL de H₂O (control). Luego de esperar unas horas de crecimiento se detuvo el crecimiento en hielo. Es aquí donde se hizo el extracto bacterial crudo siguiendo unos protocolos. Al final se guardaron las alícuotas de 0.5mL en el congelador -80°C. Luego se hizo un ensayo de BCA para determinar la concentración de proteína total y se corrió una SDS-PAGE para ver esas bandas de β-Galactosidasa, ya que esta es la proteína que quiero expresar para así usarla de control y a la misma vez aprendo bien el proceso y puedo ver con cuanta cantidad de proteína total puedo ver a FAP1 cuando continúe con mi proyecto en enero 2009. Además esto me ayuda a ver si mi vector esta en optimas condiciones y si es el adecuado para continuar con el proyecto. En conclusión aunque nos atrasamos, vamos bien y eso es lo importante. Para enero quiero continuar con mi proyecto. Una vez logre expresar la banda de β-Galactosidasa, seguiré con el mismo protocolo pero para las muestras que tengo de pGEM:FAP1 y así poder expresar la proteína de interés, FAP1. Gracias a mi mentora y gracias a BioMinds. Hasta la próxima y que tengan unas lindas vacaciones……