2da entrada…

¡Hola BioCompañeros!

 

Muchos saludos de mi parte. A continuación les coloco mi abstract.

 

Saccharomyces cerevisiae expresses FAP1 protein during cell cycling progress.  This protein has a human homologue called NF-X1, identified as a transcription factor involved in the regulation of MHC-Class II genes. NF-X1 limit inflammatory responses by negatively regulating the transcription of these genes. FAP1 is localized in the cytoplasm but, upon rapamycin treatment, translocates to the nucleus. These findings therefore suggest a nuclear role for this novel FKBP12 ligand, possibly as a transcription factor. Also, based on their amino acid sequence, both proteins contain a DNA-binding domain called the zinc finger.  This domain is required for many eukaryotic proteins in order to bind DNA for the expression of certain genes.   In this research project, a FAP1:pGEM construct was used for transformation of electrocompetent BL-21 cells and plasmid Bluescript as a control.  Transformants were first grown in LB media containing ampicillin at 37°C until reach an OD₆₀₀ of 0.5.  IPTG was later added for a final concentration of 100µg/mL to induce the expression of corresponding proteins for 4 hours.  The bacterial culture was harvested before the preparation of crude extracts. After the crude extracts were prepared, the total protein concentration was determinate by a BCA protein assay and read using a spectrophotometer.  The expression of FAP1 and b-galactosidase was monitored with SDS-PAGE. The proteins bans were visualized by Silver Staining and Coomasie Blue   However, since both proteins co-migrate on the same gel and the observed protein bands were very weak, we are now working on a protocol for the preparation of stable protein extracts.  This presentation will include the new methodology proposed by (S. Otnan. 1996) with minor modifications. This work was supported by Bio-MINDS Program sponsored by The Amgen Foundation.

 

Desde el mes pasado, el progreso que he conseguido en base a mis metas es un 4 (mucho progreso, he logrado al menos 80% de los objetivos). Hemos avanzado bastante. Lo único que me falta es esperar unos materiales y proseguir con mis experimentos a ver si puedo lograr el objetivo principal de mi trabajo (expresar a FAP1). Básicamente las dificultades han sido esperar mis materiales. Mientras tanto sigo leyendo más literatura y haciendo unos ensayos para usarlos como control. Estoy transformando Bl-21 Cells con pBKS para expresar Beta-galactosidasa y ver si este método me ayudará con mi proteína. Sigo motivado y confiado en nuestro trabajo. Espero que todos tengan mucho éxito y los veré en la presentación. Cuídense…

Recta Final…

Hola BioPartners!

Antes que todo, ¡Feliz Año Nuevo 2009! Que este año y semestre sea uno lleno de bendiciones y éxito para tod@s. Hablemos de ciencia. Este nuevo año será uno lleno de muchos retos.  El semestre pasado fue uno de contratiempos pero a pesar de todo hicimos el máximo. Todavía no hemos cumplido la meta principal del Proyecto FAP1 pero hemos desarrollado nuevas interrogantes y con éstas nuevos propósitos. Como recordarán mi propósito principal es expresar el gen fap1 y obtener su proteína. Todavía ese es el objetivo que se quiere cumplir. Ya que los métodos anteriores no han sido de mucha ayuda, buscamos nuevas alternativas. Este semestre seguiremos trabajando en la parte de la extracción proteica para poder identificar la proteína y ver sí la expresamos. Así que este semestre en vez de seguir experimentando, me he sentado a hacer un poco de bioinformatica y búsqueda de literatura para reforzar mis conocimientos y buscar mas ideas. Mi propósito primordial este semestre es construir un protocolo ideal para la extracción proteica que me sea útil, económico y rápido. En estos momentos sigo instruyéndome en literatura. Estoy haciendo uso principalmente de todos los recursos de la biblioteca del recinto y hasta ahora ha sido de gran ayuda. Este nuevo semestre junto con mi profesora plantamos unas nuevas ideas y metas. Así que para mayo 2009 esperamos haber:

a- Diseñado un protocolo ideal de Extracción Proteica
b- Probar ese protocolo y demostrar que es conveniente
c- Continuar con los propósitos anteriores
d-Presentar un poster bien hecho
e-Terminar el semestre con la satisfacción de que contribuimos a la ciencia.

El trabajo de este semestre será un poco más teórico que practico ya que hay que determinar bien los problemas que nos interfieren antes de proseguir. Esto no significa que no seguiremos con las practicas moleculares, solo que esperaremos. Por ahora no tengo en mente ninguna técnica nueva pero cuando implementemos una se los dejo saber. Bueno no ha sido fácil pero ha sido gratificante aprender y derribar obstáculos. No duden en preguntarme cualquier duda. Nuevamente les deseo el mayor de los éxitos y un año lleno de bendiciones. Hasta luego…

Luis